紫外可見分光光度計(jì)在生物學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用

 紫外可見分光光度計(jì)在生物學(xué)的應(yīng)用分析中, 常見的有蛋白質(zhì)含量檢測(cè);一般是在蛋白質(zhì)的吸收峰上作吸光度測(cè)定。因?yàn)榈鞍踪|(zhì)對(duì)紫外光的主要吸收波長(zhǎng)為280nm, 所以, 采用光度測(cè)量模式, 將儀器的波長(zhǎng)GOTO 到蛋白質(zhì)的zui大吸收峰波長(zhǎng)280nm 上, 測(cè)試其吸光度大小, 就可完成對(duì)蛋白質(zhì)的定量檢測(cè)。

目前, 紫外可見分光光度計(jì)的應(yīng)用主要是在定量分析方面。先從生命科學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用來(lái)介紹。紫外可見分光光度計(jì)在生命科學(xué)中應(yīng)用非常廣泛。zui主要的是以下5 個(gè)方面。

1. 蛋白質(zhì)分析工作中的應(yīng)用

紫外可見分光光度計(jì)在蛋白質(zhì)的分析中, zui主要的是作蛋白質(zhì)含量檢測(cè);一般是在蛋白質(zhì)的吸收峰上作吸光度測(cè)定。因?yàn)榈鞍踪|(zhì)對(duì)紫外光的主要吸收波長(zhǎng)為280nm, 所以, 采用光度測(cè)量模式, 將儀器的波長(zhǎng)GOTO 到蛋白質(zhì)的zui大吸收峰波長(zhǎng)280nm 上, 測(cè)試其吸光度大小, 就可完成對(duì)蛋白質(zhì)的定量檢測(cè)。

2. 核酸分析工作中的應(yīng)用

紫外可見分光光度計(jì)在核酸分析中的應(yīng)用, 主要是用來(lái)對(duì)核酸的定量檢測(cè); 因?yàn)楹怂岬奈辗逶?60nm。我們只要采用光度測(cè)量模式, 將紫外可見分光光度計(jì)的波長(zhǎng)GOTO 到核酸的zui大吸收峰260nm 上, 測(cè)試其吸光度大小就是了。

3. 氨基酸分析工作中的應(yīng)用

紫外可見分光光度計(jì)在氨基酸分析中的應(yīng)用, 主要是用來(lái)對(duì)氨基酸的定量檢測(cè)。因?yàn)榘被釋?duì)紫外光的主要吸收波長(zhǎng)為230nm, 所以, 我們只要采用光度測(cè)量模式, 將紫外可見分光光度計(jì)儀器的波長(zhǎng)GOTO 到氨基酸的zui大吸收峰230nm 上, 就可測(cè)試其吸光度大小, 從而計(jì)算出氨基酸的含量。但是, 因?yàn)榘被岱治鰰r(shí), 一般是將它溶解在水中, 而水在230 nm 附近有很多干擾吸收線, 所以, 在用紫外可見分光光度計(jì)對(duì)氨基酸分析檢測(cè)時(shí), 要注意防止干擾的問題。此外, 還需注意: 只有少數(shù)氨基酸有紫外吸收, 多數(shù)氨基酸無(wú)紫外吸收或很弱, 測(cè)定時(shí)要衍生化后再測(cè)。

4. 糖類分析測(cè)試工作中的應(yīng)用

紫外可見分光光度計(jì)在糖的分析中, 主要是作定量檢測(cè)。因?yàn)樘菍?duì)紫外光的主要吸收波長(zhǎng)為218nm, 所以, 對(duì)糖類進(jìn)行分析時(shí), 只要采用光度測(cè)量模式, 將紫外可見分光光度計(jì)儀器的波長(zhǎng)GOTO 到氨基酸的zui大吸收峰218 nm上, 就可測(cè)試其吸光度大小, 從而計(jì)算出糖的含量。

5. 多糖分析測(cè)試工作中的應(yīng)用

紫外可見分光光度計(jì)在多糖的分析中, 主要也是作定量檢測(cè)。因?yàn)槎嗵菍?duì)紫外光的主要吸收波長(zhǎng)為206nm, 所以, 我們只要采用光度測(cè)量模式, 將紫外可見分光光度計(jì)儀器的波長(zhǎng)GOTO 到多糖的zui大吸收峰206 nm 上, 就可測(cè)試其吸光度大小, 從而計(jì)算出多糖的含量。

但是多糖的分析難度很大。因?yàn)? 在206 nm 處的時(shí)候, 光源(氘燈) 的能量已經(jīng)很弱, 儀器光學(xué)系統(tǒng)的能量輸出也很低, 光電倍增管的靈敏度也很低, 206nm 左右的干擾也很大。所以, 用紫外可見分光光度計(jì)作多糖的分析是很難的事, 目前許多科學(xué)家正在研究中。